Brazilian spotted fever serological survey among equids at the Guarapiranga Dam area in the city of São Paulo, Brazil / Investigação sorológica da febre maculosa brasileira entre equídeos na área da represa de Guarapiranga, na cidade de São Paulo, Brasil

In the Guarapiranga dam region located in the metropolitan area of São Paulo, human cases have been reported of Brazilian spotted fever (BSF), a tick-borne disease caused by the bacterium Rickettsia rickettsii. In this area, R. rickettsii is known to be transmitted to humans by Amblyomma aureolatum, a typical dog tick that is not associated with horses. In other BSF-endemic areas, R. rickettsii transmission is associated with Amblyomma sculptum, a tick species that typically infest capybaras and horses. The Guarapiranga Dam bears abundant populations of capybaras and horses. However, since nothing is known about a possible cycle of transmission of R. rickettsii by A. sculptum in this area, this study evaluated such transmission by performing a serosurvey of horses living in the Guarapiranga Dam region. A total of 206 equids living in the margins of the Guarapiranga Dam were serologically tested for antibodies reactive to five Rickettsia species, four of the spotted fever group (R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommatis, R. rhipicephali) and one basal group species, R. bellii. Overall, 171 (83%) equids reacted positively to at least one Rickettsia species. A total of 160 (78%), 123 (60%), 80 (39%), 72 (35%), and 71 (34%), equid sera reacted to R. bellii, R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali, and R. amblyommatis, respectively, with endpoint titers ranging from 64 to 1024 for R. bellii, and 64 to 512 for the remaining four Rickettsia species. Endpoint titers to R. bellii (median: 256) was significantly higher (P<0.05) than the endpoint titers to the other four Rickettsia species, for which the median values varied from 64 to 128. A total of 65 (32%) equid sera showed endpoint titers to R. bellii at least 4-fold higher than those to any of the other four antigens, indicating that they have been exposed to R. bellii or a very closely related species. Our results provide serological evidence that the sampled equids were not frequently exposed to R. rickettsii-infected ticks. Since horses are a highly suitable sentinel for R. rickettsii transmission by A. sculptum, we conclude that this tick species has no epidemiological role in the transmission of R. rickettsii in the BSF-endemic area of the Guarapiranga Dam in the metropolitan area of São Paulo.(AU)

Na região da represa de Guarapiranga localizada na área metropolitana de São Paulo, têm sido relatados casos humanos de Febre Maculosa Brasileira (FMB), uma doença transmitida por carrapatos causada pela bactéria Rickettsia rickettsii. Nesta área de estudo, R. rickettsii é conhecida por ser transmitida aos seres humanos pelo Amblyomma aureolatum, um carrapato de cão que não está associado a cavalos. Em outras áreas endêmicas da FMB, a transmissão de R. rickettsii está associada ao Amblyomma sculptum, uma espécie de carrapato que normalmente infesta capivaras e cavalos. A represa de Guarapiranga possui populações abundantes de capivaras e cavalos; no entanto, como nada se sabe sobre um possível ciclo de transmissão de R. rickettsii por A. sculptum nessa área, este estudo avaliou essa transmissão realizando um levantamento sorológico em cavalos que vivem na região da represa de Guarapiranga. Um total de 206 equídeos que vivem nas margens da represa de Guarapiranga foram testados sorologicamente para cinco espécies de Rickettsia, sendo quatro do grupo da FMB (R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommatis, R. rhipicephali) e um do grupo basal (R. bellii). No geral, 171 (83%) equídeos reagiram positivamente a pelo menos uma espécie de Rickettsia. Um total de 160 (78%), 123 (60%), 80 (39%), 72 (35%) e 71 (34%), reagiram a R. bellii, R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali e R. amblyommatis, respectivamente, com títulos finais variando de 64 a 1024 para R. bellii e 64 a 512 para as quatro espécies restantes de Rickettsia. Os títulos finais para R. bellii (mediana: 256) foram significativamente maiores (P <0,05) do que os títulos para as outras quatro espécies de Rickettsia, para os quais os valores medianos variaram de 64 a 128. Um total de 65 (32%) equideos, os soros mostraram títulos finais para R. bellii pelo menos quatro vezes maior que os de qualquer um dos outros quatro antígenos, indicando que eles foram expostos a R. bellii ou a uma espécie muito próxima. Os resultados obtidos fornecem evidências sorológicas de que os equídeos amostrados não eram frequentemente expostos a carrapatos infectados por R. rickettsii. Como os cavalos são um sentinela altamente adequado para a transmissão de R. rickettsiipor A. sculptum, a conclusão obtida foi que essa espécie de carrapato não tem papel epidemiológico na transmissão da bactéria na área endêmica de FMB da represa de Guarapiranga na região metropolitana de São Paulo.(AU)

Comparative study of direct and indirect immunofluorescence for diagnosis of canine pemphigus foliaceus / Estudo comparativo da imunofluorescência direta e indireta para o diagnóstico do pênfigo foliáceo canino

Pemphigus foliaceus (PF) is the most common autoimmune skin disease in dogs. It is characterized by pustules, erosions, and crusts which occur due to the presence of autoantibodies that target intercellular adhesion. Histopathological examination is considered the gold standard pattern in the diagnosis, but may sometimes be inconclusive, especially when the characteristic findings are not identified. New diagnostic tests are continuously being developed and immunofluorescence assays, could be a valuable alternative diagnostic tool. This study aimed to evaluate the applicability of direct and indirect immunofluorescence (DIF and IIF) tests for the diagnosis of canine PF. Twenty eight dogs were divided into two groups: Group I with 14 dogs with PF and Group II (control) with 14 dogs with Superficial pyoderma (differential diagnoses of PF). All animals were submitted to skin biopsy to histopathological and DIF. Blood samples were collected to assess IIF. Comparing the DIF results against the histopathology test, there was an agreement of 75% (9/12) with a Kappa index of 0.77 (P<0.001). Considering IIF, the agreement was 100% (14/14), with a Kappa index of 1.0 (P<0.001). We conclude that DIF and IIF are highly effective and were useful and effective complementary examination tests for an improvement in the diagnosis of canine PF.(AU)

O pênfigo foliáceo (PF) é considerado uma das doenças tegumentares autoimunes mais frequentes em cães. Clinicamente, caracteriza-se pela presença de pústulas, erosões e crostas. O exame histopatológico é considerado o teste diagnóstico de eleição, porém pode se mostrar inconclusivo, sobretudo quando os achados característicos da doença não são observados. Novas ferramentas diagnósticas têm sido desenvolvidas e os testes de imunofluorecência são uma valiosa alternativa. Este estudo teve como objetivo avaliar a aplicabilidade das reações de imunofluorescência direta (IFD) e indireta (IFI) para o diagnóstico do PF canino. Vinte e oito cães foram divididos em dois grupos: grupo I com 14 cães com PF e grupo II (controle) com 14 cães com piodermite superficial (um dos principais diagnósticos diferenciais do PF). Todos os animais foram submetidos à biópsia cutânea, seguida de exame histopatológico e IFD. Amostras de sangue foram coletadas para realização da IFI. Comparando-se os valores de IFD com o histopatológico, obtiveram-se valores de concordância de 75% (9/12), com índice Kappa de 0,77 (P<0,001). Já na IFI, a concordância foi de 100% (14/14), com índice Kappa de 1,0 (P<0,001). Concluiu-se, então, que a IFD e a IFI apresentaram excelentes resultados e podem ser consideradas novas alternativas diagnósticas do PF canino.(AU)

Distribution of lymphocytes, immunoglobulin-containing cells, macrophages, and dendritic cells in the accessory sex glands of rams experimentally infected with actinobacillus seminis / Distribuição de linfócitos, células carreadoras de imunoglobulinas, macrófagos e células dendríticas em glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados experimentalmente com actinobacillus seminis

The distribution of cells involved in the immune response in accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis was studied. Twelve one-year old rams were experimentally infected by intraurethral (IU) (n=4) and intraepididymal (IE) (n=4) route, and four control (CON) animals were used. The animals were slaughtered 35 days post-inoculation, samples were taken from accessory sex glands, and bacteriology and histopathology tests were performed. The presence of CD4, CD8 and TCRγδ (WC1) lymphocytes, CD45RO cells, macrophages (CD14), dendritic cells (CD1b), IgA-, IgG- and IgM-containing cells (IgCC) was determined. Animals of the IE group developed clinical epididymitis. No lesions were seen in rams of the IU group; two of the intraepididymal inoculated CON developed small lesions in the epididymis. A. seminis isolates were achieved from 6:16 (37.5%) accessory sex glands in the IE group, but not in the IU and CON groups. In the CON group, IgA- and IgM- containing cells predominated in the bulbourethral glands and the disseminated prostate, and they were scarce or null in the vesicles and ampullae. A significant increase of IgA-, IgG- and IgM- containing cells was confirmed in the seminal vesicles, the ampullae and the bulbourethral glands in the IE group. In the IE and IU groups, an increase in CD4, CD8, WC1, CD45RO and CD14 was evidenced in the vesicles and ampullae. CD1b dendritic cells were present in the ampullae and vesicles with inflammatory processes. A. seminis triggered a local immune response in the IE and IU groups. These results indicate a different pattern of infiltrating immune cells in the accessory sex glands of infected A. seminis rams.

A distribuição das células envolvidas na resposta imune em glândulas sexuais acessórias de carneiros experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis foi estudada. Doze carneiros de um ano de idade foram experimentalmente infectados via intrauretral (IU) (n=4) e via intraepididimal (IE) (n=4) e quatro animais controles (CON) foram utilizados. Os animais foram abatidos 35 dias após a inoculação, amostras foram retiradas das glândulas sexuais acessórias e testes bacteriológicos e histopatológicos foram realizados. A presença de linfócitos CD4, CD8 e TCRγδ (WC1), células CD45RO, macrófagos (CD14), células dendríticas (CD1b) e células contendo IgA, IgG and IgM (IgCC) foi determinada. Os animais do grupo IE desenvolveram epididimite clínica. Não foram visualizadas lesões nos carneiros do grupo IU, dois dos CON inoculados intraepididimalmente desenvolveram pequenas lesões no epidídimo. Isolados de A. seminis foram obtidos de 6:16 (37,5%) nas glândulas sexuais acessórias no grupo IE mas não nos grupos IU e CON. No grupo CON células contendo IgA and IgM predominaram nas glândulas bulbouretrais e na próstata e foram escassas ou ausentes nas vesículas e na ampola. Um incremento significativo de células contendo IgA, IgG and IgM foi confirmado nas vesículas seminais, na ampola e nas glândulas bulbouretrais no grupo IE. Nos grupos IE e IU foi evidenciado um aumento em CD4, CD8, WC1, CD45RO e CD14 nas vesículas e ampola. As células dendríticas CD1b estavam presentes na ampola e nas vesículas com processo inflamatório. A. seminis induziu uma resposta imune local nos grupos IE e IU. Estes resultados indicam um padrão diferente de células imunes infiltrantes nas glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados por A. seminis.

Caracterização das proteínas caveolinas -1 e -2 na placenta de conceptos bovinos clonados transgênicos / Caracterization of caveolin -1 and -2 proteins in cloned and transgenic placenta of cattle

A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende-se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2)...

The transgenic application of green fluorescent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these animals present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytosis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples was cut and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS), at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 (CAV -1 and CAV- 2). The caveolins -1 were found in fetal and maternal villi, but its strongest staining was observed in the endometrial stroma. The caveolins -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane, and specifically in giant trophoblastic binucleated cell. Therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and -2 (CAV-1 and CAV-2)...

Evaluation of RT-PCR and hemi-nested RT-PCR in brain samples from dogs with neurologic signs compatible with distemper / Avaliação das técnicas de RT-PCR e heminested RT-PCR em cérebros de cães com sinais neurológicos compatíveis com cinomose

The diagnostic value of RT-PCR and hemi-nested RT-PCR (hnRT-PCR) was compared in brain samples of dogs presenting neurological signs compatible with canine distemper. Samples of central nervous system (CNS) were collected from 68 dogs and tested by direct immunofluorescence test (RFID) and, independent of the results, they were stored at -20°C for at least three years. They were submitted to the RT-PCR and hnRT-PCR techniques aiming to determine the gene responsible for the viral nucleoprotein decoding. Fifty-nine samples were positive for RIFD, 40 for RT-PCR (Kappa = 0.358) and 54 for hnRT-PCR (Kappa = 0.740). All nine RIFD negative samples were also negative for RT-PCR and hnRT-PCR. In spite of the storage duration and proper sample conditions, the estimated accordance between hnRT-PCR and RIFD demonstrated that hnRT-PCR technique can be applied in retrospective studies...

Foi comparado o valor diagnóstico das técnicas de RT-PCR e heminested RT-PCR (hnRT-PCR) em amostras de cérebro de cães com sintomatologia nervosa compatível com cinomose. Fragmentos do sistema nervoso central (SNC) colhidos de 68 animais foram testados pela Imunofluorescência direta (IFD) e, independentemente do resultado, foram armazenados a -20°C por pelo menos três anos. Após esse período, foram submetidos a RT-PCR e a hnRT-PCR com oligonucleotídeos iniciadores direcionados ao gene codificador da nucleoproteína N. As proporções de resultados positivos/examinados foram: 59/68 para a IFD, 40/68 para a RT-PCR (Kappa = 0,358) e 54/68 quando associada à heminested PCR (Kappa = 0,740). Houve nove resultados negativos nas três técnicas empregadas. Os resultados do coeficiente Kappa entre a IFD e hnRT-PCR demonstram que apesar das condições de armazenamento, a hnRT-PCR pode ser utilizada em estudos retrospectivos...

A study of experimental autoimmune encephalomyelitis in dogs as a disease model for canine necrotizing encephalitis

In the present study, the use of dogs with experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a disease model for necrotizing encephalitis (NE) was assessed. Twelve healthy dogs were included in this study. Canine forebrain tissues (8 g), including white and grey matter, were homogenized with 4 mL of phosphate-buffered saline for 5 min in an ice bath. The suspension was emulsified with the same volume of Freund's complete adjuvant containing 1 mg/mL of killed Mycobacterium tuberculosis H37Ra. Under sedation, each dog was injected subcutaneously with canine brain homogenate at four sites: two in the inguinal and two in the axillary regions. A second injection (booster) was administered to all the dogs using the same procedure 7 days after the first injection. Clinical assessment, magnetic resonance imaging, cerebrospinal fluid analyses, necropsies, and histopathological and immunohistochemical examinations were performed for the dogs with EAE. Out of the 12 animals, seven (58%) developed clinically manifest EAE at various times after immunization. Characteristics of canine EAE models were very similar to canine NE, suggesting that canine EAE can be a disease model for NE in dogs.

Genotype and expression of the enhanced gree fluorescent protein in LEW-Tg (EGFP) F455.5/Rrrc rats / Genótipo e expressão da proteína fluorescente verde melhorada em ratos da linhagem LEW-Tg (EGFP) F455.5/Rrrc

The Green fluorescent protein (GFP) was first described after being extracted from Aequorea victoria in 1987; Since then, GFP and its derivatives have been widely used in several experiments as cell and protein marker. In the present study it was verified the genotype of the offspring from crosses between heterozygote Lewis LEW-Tg (EGFP) F455.5/Rrrc rats and analyzed the expression of the enhanced green fluorescent protein (EGFP) in different cell types and genotypes. The genotype of the offspring was assessed by PCR and analysis of EGFP expression in different cells and genotypes, including mesenchymal stem cells (MSC) derived from adipose tissue and calvarial osteoblast cells. Expression of EGFP was verified by flow cytometry, fluorescence microscopy, and immunostaining. Through these methods, it was identified the genotypes of the offspring and determined the levels of expression of EGFP in two cell types. A difference in expression between the (EGFP +/+) and (EGFP +/-) genotypes was also observed in addition to the presence of autofluorescence. Further studies on the natural fluorescence of cells with the (EGFP +/-) genotype and that induced by presence of the EGFP are necessary.

A proteína fluorescente verde (GFP) foi descrita pela primeira vez após ter sido extraída de Aequorea victoria em 1987. Desde então, a GFP e seus derivados têm sido amplamente utilizados em várias experiências como marcador celular e de proteínas. O objetivo do presente estudo foi o de verificar o genótipo dos descendentes de cruzamentos entre ratos Lewis LEW-Tg (EGFP) F455.5/Rrrc heterozigotos e de analisar a expressão da proteína fluorescente verde melhorada (EGFP) em diferentes tipos celulares e genótipos. O genótipo da descendência foi avaliado por PCR e pela análise da expressão da EGFP em diferentes células e genótipos, incluindo-se as células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas de tecido adiposo e de osteoblastos de calvária. A expressão da EGFP foi verificada por citometria de fluxo, microscopia de fluorescência e imunocoloração. Foram, identificados os genótipos da descendência e determinados os níveis de expressão de EGFP em dois tipos de células. Foi também constatada uma diferença de expressão entre os genótipos (EGFP +/+) e (EGFP +/-) além da presença de autofluorescência. Mais estudos são necessários para esclarecer a fluorescência natural de células com o genótipo (EGFP +/-) e aquela induzida pela presença da EGFP.

Perfil das amostras do sistema nervoso central de bovinos com síndrome neurológica e diagnóstico da raiva bovina no serviço de defesa sanitária de Minas Gerais, 2003-2010 / Profile of central nervous system samples from cattle with neurological syndrome and diagnosis of bovine rabies by the service of sanitary defense of Minas Gerais, 2003-2010

As enfermidades do sistema nervoso central (SNC) são frequentemente relatadas em bovinos no Brasil. Apesar de Minas Gerais ter o segundo maior rebanho bovino do país, há escassez de informações referentes às doenças neurológicas que acometem esses animais. O Laboratório de Saúde Animal do Instituto Mineiro de Agropecuária (LSA/IMA) é o responsável pelo diagnóstico das enfermidades neurológicas dos animais de produção no Estado, com ênfase para a raiva e as encefalopatias espongiformes transmissíveis. Foi realizado um estudo retrospectivo dos dados referentes às amostras de SNC de bovinos com síndrome neurológica avaliadas pelo LSA/IMA de janeiro/2003 a junho/2010, com o objetivo de determinar o perfil das amostras encaminhadas para análise no serviço de defesa sanitária animal, com ênfase no diagnóstico da raiva bovina. Foram consideradas características do animal (sexo, idade, raça e tipo de morte) e da amostra (método de conservação e responsável pela coleta), sendo nas positivas para raiva, avaliada sua composição, assim como as alterações histopatológicas encontradas. Os dados relacionados à frequência de positividade nas diferentes categorias foram submetidos à análise pelo Teste Exato de Fisher. Durante o período avaliado, foram analisadas 3.731 amostras de bovinos com doença neurológica, havendo predomínio de fêmeas e mestiços, o que reflete a composição do rebanho do Estado. O método de conservação foi o principal problema encontrado, sendo apenas 25,89% das amostras encaminhadas em gelo e formol a 10%. Verificou-se uma diminuição gradativa no envio de material para análise. Quanto a raiva bovina diagnosticada no Estado, foram avaliadas 3.703 amostras pela imunofluorescência direta (IFD) e prova biológica (PB), com 41,58% de positividade, sendo dessas 282 submetidas a histopatologia. A frequência de positividade foi influenciada pela raça, idade e tipo de morte do animal. A composição da amostra alterou significativamente o resultado das análises, havendo maior frequência de positividade naquelas compostas por três ou mais fragmentos de SNC, tanto na IFD/PB, quanto na histopatologia. O bulbo, fragmento de eleição para o diagnóstico da EEB, tem sido erroneamente enviado refrigerado e não em formol a 10%. Cerebelo, tálamo, tronco encefálico e medula apresentaram maior frequência de corpúsculos de Negri que cérebro e gânglio trigeminal. O infiltrado inflamatório não supurado foi menos frequente no cérebro, que nos demais fragmentos avaliados. Conclui-se que as amostras de bovinos com síndrome neurológica enviadas ao serviço de defesa sanitária animal de Minas Gerais apresentam características distintas, sendo o método de conservação o principal problema encontrado. Além disso, a raiva bovina diagnosticada na população estudada é influenciada pelas características do animal e da amostra, sendo indicado o envio de diferentes fragmentos do SNC para análise, conservados adequadamente, o que contribui para um diagnóstico mais preciso.(AU)

Diseases of the central nervous system (CNS) are often reported in cattle in Brazil. Although the State of Minas Gerais has the second largest cattle herd in the country, there is little information from this state concerning neurological diseases that affect cattle. The Laboratório de Saúde Animal of the Instituto Mineiro de Agropecuária (LSA/IMA) is in charge of the diagnosis of neurological diseases of livestock in the State, with emphasis on rabies and transmissible spongiform encephalopathies. A retrospective study was conducted on data from cattle with neurologic diseases evaluated by the LSA/IMA from January/2003 to June/2010, aiming to determine the profile of CNS samples sent for analysis, with emphasis on the diagnosis of bovine rabies. Issues related to the animal (sex, age, breed and type of death) as well as to the sample (method of conservation, person in charge the collection, and region of the CNS sampled) were evaluated. Data on frequency of rabies positive samples were analyzed by Fisher's exact test. During the period studied, 3,731 samples from cattle with neurological signs were analyzed, with a predominance of females and crossbred cattle. The method of preservation was the main problem encountered with only 25.89% of samples sent both refrigerated and fixed in 10% formaldehyde. There was a gradual decrease in submission of samples during the course of this study. All 3,703 samples were evaluated by direct fluorescent antibody test (DFA) and biological test (BT) for rabies, 41.58% being positivity for rabies, and 282 of those samples being subjected to histopathology examination. The frequency of positivity was influenced by breed, age, and type of death. Composition of the sample significantly influenced the results, with higher frequency of positivity in samples containing three or more CNS fragments by DFA, BT, or histopathology. The medulla, which is the fragment of choice for diagnosis of BSE, has often been mistakenly submitted under refrigeration, but not in 10% formalin. Cerebellum, thalamus, brain stem, and spinal cord had higher frequency of Negri bodies than the cerebral cortex and trigeminal ganglia. The nonsuppurative inflammatory infiltrate was less frequent in the cerebral cortex than in other CNS fragments. In conclusion, CNS samples from cattle with neurological syndrome sent to the animal health protection service of Minas Gerais are heterogeneous, and the preservation method was the major problem hindering and adequate diagnosis. In addition, diagnosis of rabies was influenced by parameters of the animal as well as the CNS sample. Submission of properly preserved fragments from various segments of the CNS contributes to a more accurate diagnosis of rabies in cattle.(AU)

Leishmania (Viannia) braziliensis is the main species causing cutaneous leishmaniasis in the Federal District of Brazil

The first autochthonous case of American cutaneous leishmaniasis was reported in the Federal District in 1980, and the species involved in this type of leishmaniasis was unknown. This study aimed to identify the species that causes the disease in the Federal District and to investigate its clinical and epidemiological aspects. Between 2000 and 2007, 71 autochthonous cases of leishmaniasis were reported in the Federal District. Leishmania species were identified by means of direct immunofluorescence reactions using monoclonal antibodies and restriction fragment length polymorphism. The species of 40 (56.33%) out of 71 samples were identified. Thirty-six (90%) were identified as Leishmania (Viannia) braziliensis and four (10%) were identified as Leishmania (Leishmania) amazonensis. In this area, the disease had clinical and epidemiological characteristics similar to those found in other Brazilian regions.

Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniasis / Ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em cães com leishmaniose visceral

Uninfected dogs and those naturally infected with Leishmania chagasi exhibiting different clinical forms of disease were evaluated for the presence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies. Blood samples were collected from 110 mongrel dogs. Sera were tested using the indirect fluorescent antibody test (IFAT), and the animals with visceral leishmaniasis (VL) (n=60) were classified clinically. Out of the 110 sera investigated, 5 (4.5 percent) were positive for N. caninum (IFAT>50) and 36 (32.7 percent) for T. gondii (IFAT>16). Anti-L. chagasi antibody titers in asymptomatic dogs (n=10) were found to be significantly lower (P<0.05) than those in oligosymptomatic ones (n=22), which were in turn significantly lower (P<0.05) than those in symptomatic ones (n=28). No association between Leishmania and N. caninum infections was observed. Among dogs infected with L. chagasi, a tendency (P=0.053) towards an association between the infection with T. gondii and the appearance of VL symptoms was observed, suggesting that the clinical manifestation of VL in dogs may enhance their susceptibility to T. gondii. The possible influence of the immunosuppressive status of canine leishmaniasis in the different clinical forms of the disease is discussed.

A presença de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii foi avaliada em cães não infectados e naturalmente infectados com Leishmania chagasi manifestando diferentes formas clínicas da enfermidade. Amostras de sangue foram coletadas de 110 cães sem raça definida. Os soros foram avaliados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais com leishmaniose visceral (LV) (n=60) foram classificados clinicamente. Dos 110 soros analisados, 5 (4,5 por cento) foram reativos para N. caninum (RIFI>50) e 36 (32,7 por cento) para T. gondii (RIFI>16). Os títulos de anticorpos anti-L. chagasi em cães assintomáticos (n=10) foram significativamente (P<0,05) mais baixos que aqueles verificados em oligossintomáticos (n=22), que por sua vez foram significativamente menores (P<0,05) que em cães sintomáticos (n=28). Não foi observada associação entre infecções por Leishmania e N. caninum. Entre os cães infectados com L. chagasi, verificou-se uma tendência de associação (P=0.053) entre infecção com T. gondii e aparecimento de sinais clínicos da LV, o que sugere que a manifestação clínica da LV em cães pode aumentar sua susceptibilidade ao T. gondii. A provável influência do quadro de imunossupressão em diferentes formas clínicas da leishmaniose canina é abordada.

Sensibilidade da técnica de imuno-histoquímica em fragmentos de sistema nervoso central de bovinos e equinos naturalmente infectados pelo vírus da raiva / Sensitivity of the Immunohistochemistry technique in central nervous system fragments of cattle and horses naturally infected by rabies virus

A raiva é uma zoonose viral que acomete o sistema nervoso central (SNC) de mamíferos, considerada um grave problema de saúde pública. Herbívoros (bovinos e equinos) são frequentemente acometidos pela in-fecção após serem atacados por morcegos hematófagos (Desmodus rotundus). A técnica de imunofluorescência direta (IFD) realizada em tecidos frescos, recomendada pela Organização Mundial de Saúde (OMS), é utilizada para o diagnóstico da raiva. A técnica de imuno-histoquímica (IHQ) é utilizada para detectar antígenos em tecidos fixados, pelo uso de anticorpos monoclonais/policlonais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade da IHQ na detecção de antígenos do vírus da raiva em amostras de SNC de herbívoros fixadas em formol, analisando a distribuição antigênica em diferentes fragmentos do SNC. Os resultados demonstraram concordância das técnicas de IFD e IHQ. A IHQ mostrou maior sensibilidade em amostras de bovinos em relação às de equinos, especialmente quando realizada em fragmentos de cerebelo e tronco encefálico. A detecção de antígeno nestes fragmentos foi mais consistente para ambas as técnicas, nas duas espécies. Estes resultados demonstram que a IHQ pode ser empregada para a vigilância epidemiológica da raiva, entretanto, recomenda-se cautela ao se empregar a IHQ para diagnóstico de doença em herbívoros, especialmente quando o fragmento encaminhado ao laboratório for apenas o hipocampo.

Rabies is a viral zoonosis that causes disease in the central nervous system (CNS) of mammals and it is considered a serious problem of public health. Herbivorous (bovines and equines) are often infected after being attacked by vampire bats (Desmodus rotundus). The direct fluorescent antibody technique is used as a diagnostic test to detect viral antigens in fresh tissues and is recommended by the World Health Organization. The immunohistochemistry technique (IHC) is used to detect the viral antigen through the use of monoclonal/policlonal antibodies in formalin-fixed tissues. The aim of this work was to evaluate the sensitivity of the IHC in samples of CNS of herbivorous fixed in formol, analyzing the antigenic distribution in different fragments of the CNS. The results demonstrated good agreement between the two techniques for the rabies diagnosis. The IHC presented higher sensitivity in samples of cattle comparing to horse samples, especially in fragments of cerebellum and brain stem. These fragments demonstrated to be more suitable for antigen detection by both techniques in the two species. These data demonstrate that the IHC is suitable for rabies vigilance yet cautions should be taken in examining cattle and horses samples, when the submitted specimen is only the hippocampus.

Seroprevalence of anti-Leishmania spp. antibodies in rural dogs from the city of Monte Negro, State of Rondônia, Brazil / Soroprevalência de anticorpos anti-Leishmania spp. em cães rurais do município de Monte Negro, Estado de Rondônia, Brasil

The present study assessed the prevalence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs from the city of Monte Negro, State of Rondônia, Brazil. ELISA (NE ≥ 3) and IFAT (1:40) were used to evaluate 161 serum samples collected from rural dogs from Monte Negro. Forty-five (27.9%) dogs were positive by ELISA tests and five (3.1%) were positive by IFAT. The present study showed for the first time the frequency of exposure to Leishmania spp. in dogs in the State of Rondônia, Amazon Region.

O presente estudo determinou a prevalência de anticorpos anti-Leishmania spp. em cães do município de Monte Negro, Estado de Rondônia, Brasil. Foram utilizados os testes de ELISA (NE ≥ 3) e RIFI (≥1:40) para avaliar 161 amostras de soro de cães da zona rural do município. Quarenta e cinco cães (27,9%) reagiram no teste de ELISA e cinco (3,1%) na RIFI. O presente estudo demonstra pela primeira vez a freqüência de exposição por Leishmania spp. em cães de Rondônia, Região Amazônica.

Surveillance of canine visceral leishmaniasisin a disease-free area / Vigilância da leishmaniose visceral canina em área indene

Leishmaniasis is an important re-emergent parasitosis worldwide, particularly in tropical countries. There are no reports of autochthonous disease in the State of Paraná, southern Brazil. No surveillance has been carried out in the most populated areas such as the city of Curitiba and its surroundings. The purpose of the present study was to determine the seroprevalence of visceral leishmaniasis in dogs at the Center for Zoonosis Control of São José dos Pinhais, Paraná, before euthanasia. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunofluorescence antibodytest (IFAT) were used to detect antibody levels against Leishmania sp. in dog sera. Imprints of the popliteal lymph nodes that were also randomly collected from 50 dogs with suspected clinical signs of visceral leishmaniasis, and evaluated under light microscopy for the detection of amastigote forms, were negative. A total of 364 dog samples were tested. The results showed only one positive sample (0.0027%) by ELISA test but negative by IFAT, however, the dog had no clinical signs. Random surveillance of dog populations from several districts of a metropolitan area may be a means of preventing Leishmania spreading. Based on our results, the city of Curitiba and its metropolitan area were considered at low risk for visceral leishmaniasis.

A leishmaniose é uma importante parasitose re-emergente observada no mundo, particularmente em países tropicais. Não há ainda relatos de casos autóctones no estado do Paraná. Não há até o momento referência de vigilância no reservatório canino, tais como Curitiba e região metropolitana do estado. O objetivo do estudo foi determinar a soroprevalência da leishmaniose visceral em cães entregues ao Centro de Controle de Zoonoses de São José dos Pinhais, Paraná para eutanásia. A detecção sorológica da presença de anticorpos contra Leishmania sp. foi realizada por(ELISA) indireto e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Além disso, impressão de linfonodo poplíteo coletadas ao acaso de 50 cães com sinais clínicos suspeitos para leishmaniose visceral e analisados sob microscopia óptica para detecção de formas amastigotas, foram negativas. Amostras de soro de 364 animais foram testadas, e os resultados mostraram somente uma amostra positiva (0,0027%), reagente ao ELISA e negativa à RIFI, entretanto, o cão não apresentava sinais clínicos. A vigilância ao acaso em uma população de vários locais de uma área metropolitana pode ser uma forma de prevenção da disseminação da doença. Com base nos resultados observados, Curitiba e região metropolitana foram consideradas de baixo risco para a leishmaniose visceral.

Inquérito soroepidemiológico de leishmaniose canina em áreas endêmicas de Cuiabá, Estado de Mato Grosso / Seroepidemiological survey of canine leishmaniasis in endemic areas of Cuiabá, State of Mato Grosso

As leishmanioses são zoonoses em expansão no Brasil, tendo o cão importância na transmissão e dispersão da doença, principalmente em áreas de leishmaniose visceral. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a soroprevalência de leishmaniose em cães domiciliados na zona urbana de Cuiabá. Para a pesquisa foram selecionados quatro bairros de Cuiabá, sendo um em cada regional administrativa. A amostragem canina foi definida estatisticamente, considerando-se a prevalência de 8,4 por cento. Dos 468 cães analisados, 16 foram reagentes na imunofluorescência indireta, obtendo-se uma prevalência geral de 3,4 por cento. Não foi observada predisposição racial, sexual e etária para a ocorrência da leishmaniose canina. Os principais fatores de risco identificados na ocorrência da infecção canina na Cidade de Cuiabá, foram a localização dos cães no peridomicílio, bem como a proximidade das residências de matas, evidenciando mudanças na ocorrência da doença no ambiente urbano.

Leishmaniases are zoonoses that are undergoing expansion in Brazil. Dogs are of importance regarding transmission and dispersion of the disease, especially in areas presenting visceral leishmaniasis. The aim of this study was to evaluate the seroprevalence of leishmaniasis among domestic dogs in the urban area of Cuiabá. For this investigation, four districts of Cuiabá were selected, one in each administrative region. The dog sampling was defined statistically, taking the prevalence to be 8.4 percent. Among the 468 dogs examined, 16 presented an indirect immunofluorescence reaction, thus resulting in an overall prevalence of 3.4 percent. There was no predisposition towards canine leishmaniasis occurrences in relation to breed, sex or age. The main risk factors for occurrences of canine infection identified in the city of Cuiabá were the presence of dogs living in areas surrounding homes and the proximity of homes to forests. Thus, there have been changes in leishmaniasis occurrences within the urban environment.

Ophthalmic, hematologic and serologic findings in dogs withsuspected Ehrlichia canis infections / Achados oftálmicos, hematológicos e sorológicos em cães com suspeitade infecção pela Ehrlichia canis

The objective of the present study was to correlate ophthalmic and haematological findings, compared with the serological data obtained by indirect fluorescent antibody test (IFATT) and by dot-blot linked immunoassay (DBELIA) in 51 dogs with uveitis due to possible ehrlichiosis infection. Thirty-four positive IFAT and forty-four positive DBELIA results were obtained in serum samples.The high correlation between uveitis and a positive serology for Ehrlichia canis was established. The DBELIA test was moresensitive for the diagnosis of ehrlichiosis than IFAT.

O objetivo do presente trabalho foi correlacionar os achados oftálmicos e hematológicos, comparados aos dados sorológicos obtidos por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e dot-blot ELISA (DBELIA) de 51 cães com uveíte, possivelmente devido a erliquiose. Trinta e quatro soros sangüíneos foram positivos pela RIFAT e quarenta e quatro pelo DBELIA. Foi estabelecida uma alta correlação entre uveíte e sorologia positiva para a Ehrlichia canis. O DBELIA foi mais sensível para o diagnóstico da erliquiose comparativamente a RIFI.

Leishmaniose visceral canina no município de São Vicente Férrer,Estado de Pernambuco, Brasil / Canine visceral leishmaniasis at the urban area of the Municipality of

Iniciou-se um estudo sobre a ocorrência de leishmaniose visceral canina em cães do município de São Vicente Férrer noestado de Pernambuco. No período de julho de 2003 a julho de 2005, foram coletadas amostras de sangue de 503 cãesdomésticos, de diferentes localidades, escolhidos aleatoriamente, para exame pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI).Foram processadas preliminarmente 503 amostras de soro, das quais 12,3% (62 amostras) estavam positivas para Leishmania.Quanto às titulações encontradas nos soros reagentes, 77,4% (48 amostras) tiveram títulos de 1:40; 9,6% (6 amostras), 1:80;8,0% (5 amostras), 1:160; 3,2% (2 amostras) e 1:320 e 1,6% (1 amostra) 1:640. A partir desse resultado foram selecionados20 dos cães sorologicamente positivos para realização do aspirado de medula óssea. Destes, 85% (17) apresentaramformas amastigotas de Leishmania sp. Este é o primeiro registro do encontro de cães sorologicamente positivos paraLeishmania no município de São Vicente Férrer, estado de Pernambuco, Brasil

A study was initiated on the occurrence of Visceral Canine leishmaniasis in dogs of the Municipality of São Vicente Férrer in thestate of Pernambuco. In the period of July of 2003 the July of 2005, blood samples of 503 domestic dogs were collected fromdifferent localities, randou by and they were examined by using immunoflorecens test (IFAT). A total of 503 samples of serumwere processed preliminarily of which 12.3% (62 samples) were positive for visceral leishmaniasis. Where 77.4% (48 samples)had headings of 1:40; 9.6% (6 samples) 1:80; 8.0% (5 samples) 1:160; 3.2% (2 samples) 1:320 and 1.6% (1 sample) 1:640.From this result 20 of the sorologicamente positive dogs for accomplishment of the inhaled one of borne marrow had beenselected. Of these, 85% (17) had presented forms amastigotas of Leishmania sp. This is the first register of the detention ofsorologicamente positive dogs for Leishmania at Municipality of São Vicente Férrer, in state of Pernambuco, Brazil

Detecçäo de anticorpos para Toxoplasma gondii em soro de suínos criados e abatidos em frigoríficos da regiäo da grande Porto Alegre-RS, Brasil / Detection of antibodies against Toxoplasma gondii in sera from swine raised and slaughtered in the great Porto Alegre-RS abbattoirs, Brazil

No presente trabalho, objetivou-se contribuir com dados sobre a freqüência de sororeagentes para Toxoplasma gondii em suínos criados e abatidos na Regiäo da Grande Porto Alegre e fornecer subsídios sobre a importância da transmissäo deste protozoário, por suínos. Foram coletadas amostras de 240 suínos em frigoríficos da regiäo. A freqüência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, determinada através da técnica de hemaglutinaçäo indireta, foi de 20 por cento de soros iguais ou superiores a diluiçäo 1:64. Na técnica de imunofluorescência indireta, foram encontrados 33,75 por cento de soro com diluiçäo iguais a 1:16 ou superiores.

Prevalência de anticorpos antiBabesia equi em eqüinos no Planalto Catarinense / Prevalence of Babesia equi antibodies in horses in the Santa Catarina Plateau, Brazil

Para avaliar a prevalência de anticorpos antiBabesia equi, através da técnica de imunofluorescência indireta (IFI), foram examinados 397 amostras de soro. As amostras de sangue, para obtençäo dos soros, foram coletadas de eqüinos de diferentes idades, raças, sexos, nascidos e criados no Planalto Catarinense, dos municípios de Lages, Säo Joaquim, Bom Jardim da Serra, Campos Novos, Anita Garibaldi, Curitibanos e Correia Pinto. Os resultados obtidos indicaram a existência de 50,38 por cento de animais sorologicamente reativos para B. equi, na diluiçäo de 1:40. Entre os municípios, os percentuais de animais soropositivos variaram de 18,51 por cento a 64,70 por cento.

Estudo clínico da infecção de felinos pelo vírus da leucemia felina em São Paulo / Clinical studies of feline leukemia virus infection among cats in São Paulo

Para avaliar a freqüência da infecção pelo vírus da leucemia felina (VLF), 298 gatos doentes, atendidos no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, foram submetidos ao teste imunoenzimático para a detecção de antígenos virais do VLF (Leukassay F., Pitman Moore Inc.). Dos animais submetidos ao teste, 37 (12,5%) apresentaram-se positivos, com diagnóstico clínico de hemobartonelose (10), linfoma mediastinal (7), icterícia e febre (3), peritonite infecciosa felina (2), anemia hipoplásica (2), uveíte (2), gastroenterite (2), trombocitopenia (2), periodontite (2) atrofia do timo (1), doença respiratória crônica (1) e contactante e assintomático (1). A maioria dos animais acometidos situava-se na faixa etária de 30 a 36 meses, tendo o mais jovem um mês e o mais velho 12 anos de idade. A infecção foi observada com maior freqüência entre os machos, que responderam por 67,5% dos casos, havendo também predominância dos felinos sem raça definida.

Serum samples from 298 sick cats were submitted to enzyme linked immunosorbent assay for detecting feline leukemia virus (Felv) antigen (Leukassay F., Pitman Moore), aiming to evaluate the frequence of Felv infection among domestic cats. Thirty seven Felv (12.5%) positiva cats were found. The reagents were observed among cats with clinical diagnosis of hemobartonellosis (10), mediastinal lymphoma (7), jaundice and fever (3), feline infectious peritonitis (2), hypoplastic anemia (2), uveitides (2), gastroenteritidis (2), trombocytopenia (1), periodontitides (2), atrophy of thymus (1), chronic respiratory disease (1), carcinoma (1), and asymptomatic (1). The great majority of cats were 30 to 36 months old, being the youngest one month old and the oldest one, twelve years. Felv infection was more frequent among male cats (67.5%) and in short haired domestic cats.

Inoculación experimental del paramixovirus de ojo azul en ratas de laboratorio (cepa Wistar), vía intramuscular / Experimental inoculation of blue eye paramyxovirus in laboratory rats (Wistar) intramuscularly

Se utilizaron un total de 22 ratas (cepa Wistar) de las cuales 2 animales fueron testigo y 20 ratas fueron inoculadas con 1 ml del paramixovirus del ojo azul (POA) con un título de 10 5.55 DICC/ml, por vía intramuscular. El día 0 se tomaron muestras sangúineas por vía intracardiaca de 2 animales testigos, los cuales se sacrificaron posteriormente. Los días 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35 posinoculación (PI) se tomaron muestras de sangre para la detección serológica de anticuerpos contra POA, utilizando la técnica de inhibición de la hemaglutinación (IHA), seroneutralización (SN), para realizar biometrías hemáticas (BH) y la obtención de la capa flogística para aislamiento viral. Además se obtuvieron muestras de órganos (encéfalo, pulmón y tonsila) para intentar el aislamiento en tres líneas celulares (MDBK, PK-15, BT) e inmunofluorescencia en cultivo celular (IFCC); de estas mismas muestras se hicieron estudios histopatológicos (HP). Se recolectaron heces y orina durante los 35 días, para el aislamiento e IFCC. En los resultados de las pruebas serológicas se detectaron anticuerpos a partir del décimo día PI, con títulos de 1:4 hasta 1:256 para SN y de 1:8 hasta 1:64 para IHA. En el aislamiento viral de órganos, capas flogísticas, heces y orina se pudo aislar el virus durante todo el periodo de experimentación en las tres líneas celulares, coincidiendo estos resultados con las IFCC; las BH mostraron variación en los valores de neutrófilos, linfocitos y monocitos. No hubo presencia de lesiones significativas tanto macro como microscópicas